【中文名称】：伪狂犬病毒gE2.0抗体诊断试剂盒

【产品规格】：96T/48T。

【保存条件】：2-8℃低温保存

【保质期】：6个月，所有试剂盒均提供批次。

预期用途：定性检测猪血清/血浆中抗伪狂犬病毒gE蛋白抗体，适用于猪场野毒感染筛查、疫苗免疫效果评估、伪狂犬病净化监测。

检测原理：采用间接ELISA法，酶标板预包被重组gE蛋白抗原，若样本中存在gE抗体，会与板上抗原结合，后续通过HRP标记二抗显色，颜色深浅与抗体含量正相关。

样本采集与预处理

样本类型：猪血清、血浆（EDTA/柠檬酸钠抗凝）。

采集方法：全血3000~4000r/min离心10分钟分离血清，要求血清清亮无溶血、无细菌污染，避免反复冻融。

保存条件：样本采集后2~8℃可保存1周，-20℃可长期保存，长期保存需分装避免反复冻融。

样本稀释：待检血清用样本稀释液按1:10比例预稀释（如90μL稀释液+10μL血清），充分混匀后备用。

四、操作步骤

试剂准备

试剂盒提前从冷藏环境取出，室温平衡至少30分钟，所有试剂充分摇匀后使用。

浓缩洗涤液用蒸馏水/去离子水按1:20比例稀释（如10mL浓缩液+190mL水），若低温下有结晶析出，可37℃水浴助溶后使用。

根据实验所需数量取出酶标板条，未使用的板条立即放回自封袋密封，2~8℃保存。

加样与孵育

设置空白对照1孔（仅加100μL样本稀释液）、阴性对照2孔、阳性对照2孔，其余为样本孔。

阴、阳性对照孔直接加入对应对照血清100μL；样本孔加入90μL样本稀释液+10μL预稀释后血清（样本最终稀释比例为1:100），充分混匀。

贴好封板膜，37℃恒温避光孵育30分钟（推荐使用水浴箱或湿盒，避免液体蒸发）。

洗涤

揭去封板膜，甩去孔内液体，每孔加满工作洗涤液，静置30秒后甩干，重复洗涤5次，最后一次在吸水纸上拍干，确保无残留液体。

使用自动洗板机时，每孔注入350μL洗涤液，浸泡1分钟后洗涤，结果更稳定。

加酶标二抗

除空白孔外，每孔加入100μL HRP标记二抗，贴好封板膜，37℃恒温避光孵育30分钟。

重复步骤3的洗涤操作。

显色与终止

每孔依次加入TMB底物液A、B各50μL，轻轻振荡混匀，37℃避光显色10分钟，此时阳性孔会逐渐变为蓝色。

每孔加入终止液50μL，溶液由蓝色变为黄色，终止反应后10分钟内完成读数。

读数

酶标仪以空白孔调零，检测450nm波长处各孔OD值（推荐用630nm作为参比波长，减少板底划痕干扰）。

结果判定

实验有效性判断

阳性对照平均OD值≥0.6，阴性对照平均OD值≤0.10，实验结果有效。

若对照结果不符合上述要求，需重新进行实验。